革兰染色法,革兰氏染色的步骤和原理？

摘要最后一步可以省略通常革兰氏染色法包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤1.初染：向玻片上滴加结晶紫2.媒染：向玻片上滴加卢氏碘液（都只是简单写一下）上述两部，作用是将细菌细胞壁着色3.脱色：这是最重要的

最后一步可以省略通常革兰氏染色法包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤1.初染：向玻片上滴加结晶紫2.媒染：向玻片上滴加卢氏碘液（都只是简单写一下）上述两部，作用是将细菌细胞壁着色3.脱色：这是最重要的一步一般用酒精进行脱色，时间很短大概30s左右革兰染色法。经过脱色，如果该细菌是革兰氏阳性菌，那么由于其细胞壁含有大量肽聚糖，会将染色剂保留在细胞壁中，在油镜下观察为紫色。如果是革兰氏阴性菌，由于它的细胞壁中肽聚糖含量很低，并且革兰氏阴性菌还有一层外膜，脂含量高。在经过脱色剂，外膜会迅速溶解，阴性菌那层薄薄的肽聚糖层无法阻挡染色剂的溶出。最终基本成无色或很淡的紫色。到这一步其实就已经将两种类型的细菌分开了。阳性菌油镜呈紫色，阴性菌呈无色。4.如果再经过最后一步（复染）无色的阴性菌会被复红染成红色。当然这一步可省可不省。复染的目的是为了让两种菌的染色差别更大，更好观察。希望可以帮到你

革兰染色法,革兰氏染色的步骤和原理？插图

革兰染色的关键步骤是什么

脱色时间的掌握，是革兰染色成败的关键。

革兰氏染色四大基本步骤：结晶紫初染、碘液媒染、乙醇脱色、沙黄复染，其中乙醇脱色是关键。因为如果脱色过度，有可能会使革兰氏阳性菌呈假阴性，如果脱色不够，有可能使革兰氏阴性菌呈假阳性。

革兰氏染色是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，革兰氏染色属复染法，即将标本固定后，先用龙胆紫染色，加碘液媒染后用酒精脱色，再用蕃红复染。

拓展资料：

革兰染色法，由丹麦病理学家Christain Gram于1884年创立，是细菌学中很重要的鉴别染色法，因为通过此法染色，可将细菌鉴别为革兰阳性菌（G+）和革兰阴性菌（G-）两大类。

如果将细菌做革兰染色，凡是染后菌体呈蓝紫色的，称为“革兰阳性菌”；菌体是伊红色，称“革兰阴性菌”。无论阳性菌还是阴性菌，都有杆菌和球菌。

葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌是临床最为常见的病原菌，葡萄球菌属于革兰阳性菌，大肠杆菌属于革兰阴性菌中的肠杆菌科，除大肠杆菌以外，临床较常见的肠杆菌科细菌还有变形杆菌属，沙门菌属、克霉白菌属；铜绿假单胞菌是临床常见的较耐药革兰阴性杆菌。

参考资料：革兰染色_百度百科

革兰氏染色的方法和结果判断

通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。染色的差异主要是由于阴性与阳性细菌细胞壁的差异所引起的。

详细阐叙革兰氏染色法的步骤

革兰氏染色

一、目的：在细胞发放之前，利用标准的革兰氏染色法对即将发放的细胞悬液进行检测，判断细胞悬液中是否含有革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌。

二、原理：

通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。

三、实验用品准备：

灭菌玻片、10-100ul移液器、10-100ul灭菌移液吸头、100ul-1000ul移液器、100ul-1000ul移液吸头、接种环、酒精灯、打火机、革兰氏染色液、吸水纸、显微镜、香柏油、擦镜纸、计时器

四、操作：

1 涂片：取灭过菌的载玻片于实验台上，用移液枪吸取10ul待检样品滴在载玻片的中央，用烧红冷却后的接种环将液滴涂布成一均匀的薄层，涂布面不宜过大。

2 干燥：将标本面向上，手持载玻片一端的两侧，小心地在酒精灯上高处微微加热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰或加热时间过长，以防标本烤枯而变形。

3 固定：固定常常利用高温，手持载玻片的一端，标本向上，在酒精灯火焰处尽快的来回通过2-3次，共约2-3秒种，并不时以载玻片背面加热触及皮肤，不觉过烫为宜（不超过60℃），放置待冷后，进行染色。

4 初染：在涂片薄膜上滴加草酸铵结晶紫1-2滴，使染色液覆盖涂片，染色约1min。

5 水洗：斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。

6 媒染：用100-1000ul移液枪吸取约300ul碘液滴在涂片薄膜上，使染色液覆盖涂片，染色约1min。

7 水洗：斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。

8 脱色：斜置载玻片，滴加95%乙醇脱色，至流出的乙醇不现紫色为止，大约需时20-30S，随即水洗。

9 复染：在涂片薄膜上滴加沙黄染液1-2滴，使染色液覆盖涂片，染色约1min。